由于不同的生物材料细胞壁的结构和组成不同，而细胞壁结构的破坏是提取总DNA的关键步骤。同时细胞内的物质也根据生物种类的不同而有差异，因此不同生物采用的提取方法也不同，一般要根据具体的情况来设计实验方法。前几节内容我们分别讲到了苯酚抽提法、碱裂解法。本节就开始介绍采用CTAB法提取植物总DNA的技术。

CTAB法原理

CTAB(hexadecyltrimethylammonium bromide,十六烷基三甲基溴化铵)，是一种阳离子去污剂,具有从低离子强度溶液中沉淀核酸与酸性多聚糖的特性。在高离子强度的溶液(>0.7mol/L NaCl),CTAB与蛋白质和多聚糖形成复合物，只是不能沉淀核酸.通过有机溶剂抽提，去除蛋白、多糖、酚类等杂质后加入乙醇沉淀即可使核酸分离出来。

主要试剂

1、2×CTAB提取缓冲液：

试剂	用量（g/L）
Tris-HCl(pH 8.0)	100mmol/L
EDTA	20mmol/L
NaCl	1.4mol/L
CTAB	2%
巯基乙醇(随用随加)	40mmol/L

2、TE 缓冲液:

Tris-HCL

试剂	用量（g/L）
Tris-HCL	10mmol/L
EDTA	1mmol/L

3、氯仿-异戊醇（24 ：1）
4、70% 乙醇
5、液氮

实验步骤

1. 取1-50g新鲜植物材料，于液氮中研成粉。

2. 将冻粉转入预冷的离心管中，立即加入等体积(w/v) 2×CTAB提取缓冲液，65℃保温10-20分钟，其间不时摇动。
3. 加入等体积的氯仿/异戊醇，轻缓颠倒离心管混匀，室温下，12000r/min 离心10-20分钟。
4. 将上清液转入另一离心管中,加入等体积的氯仿/异戊醇，颠倒离心管混匀，室温、12000r/min 离心10分钟。
5. 将上层水相转入新的经硅烷化处理的离心管中，加入0.6-1倍体积的异丙醇,混匀，室温下放置30分钟。
6. 3500-4000r/min 离心5-10分钟，去上清液, 70%乙醇漂洗，沉淀吹干。
7. 风干后加入40ul的TE 缓冲液溶解DNA，-20℃保存备用。。
8. 取2ul溶液电泳检测。

常见问题及建议

可能出现的情况	可能原因	建议
第一次24:1抽提后上清是绿色的浑浊液体。	样取的较多	1、样品取样适量；2、加CTAB时可以适量多点。
第一次上清是褐色的（正常情况应该是浅黄色，透明）	样品在裂解过程中被氧化了或是降解了。	取样的时候尽量取了及时放在液氮中；确定β巯基乙醇按比例加在了CTAB缓冲液中；再者，样磨完了加CTAB缓冲液的时候速度要快，混匀要充分；如果机器磨样，尽量倒出钢珠，再加CTAB缓冲液。
加入异丙醇后没见絮状沉淀	取样太少；样品碾磨不够好	12000r/min离心2min，一般都会有沉淀附着管壁，同样可以收集到DNA。
DNA电泳检测时候有拖尾，点样孔不干净	拖尾是DNA降解，点样孔不干净是含有部分蛋白	对于这两种情况，只能尽量做好每一步，减少每一步不必要的影响

实验注意事项

1、液氮研磨时，小心操作，以免冻伤。

2、所有操作均需温和，避免剧烈震荡。

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核酸提取方法 | CTAB法

实验注意事项