BCA法蛋白定量试剂盒

BCA Protein Assay Kit

产品及特点  本产品是基于BCA法(bicinchoninic acid，二奎啉甲酸法)蛋白检测原理开发的蛋白质浓度测定产品，BCA法跟Lowry法的第一步完全相同，就是在碱性条件下，蓝色的Cu2+被蛋白质还原成紫色的Cu+。此反应类似Cu2+与Biuret(NH2-CO-NH-CO-NH2，双缩尿)发生的反应，故又叫Biuret反应(Biuret反应本省就可以测定蛋白质浓度，目前仍然是医院血液蛋白定量的方法)。第二步，Cu+与BCA发生反应形成水溶性的紫色化合物，通过分光在562nm处测定紫色化合物的量就可以精确定量蛋白质浓度。BCA 检测灵敏度比Biuret反应高100倍左右。

1．对各种常见的去污剂不敏感，但对Cu的还原剂和螯合剂比较敏感。

2．比Lowry法更加简单快捷，45分钟内完成测定。

3．试剂稳定，室温可以放置两年。工作液1 天内有效。

4．线性范围在 20～2000μg/mL。如果需要范围在0.1-10ug/mL，需要选用超敏BCA。

5．最小测量体积为1-20μL。

6．终产物稳定，变异系数远小于考马斯亮蓝法蛋白定量。

7．可以检测最短到双肽，而Bradford法需要一定大小的蛋白质。

8．有常规(试管)和微量(96孔板)两种检测模式。

运输及保存 常温运输和保存(但BSA 标准品需要-20℃保存)，有效期两年。

使用方法 

一：96 板操作模式

1．取一块96孔板，先进行编号(编号可以根据样品数增加)，并按照下表加入BSA 标准，待测样品和溶解待测样品的缓冲液(可以用水替代)：

编号 BSA 标准(2ug/uL) 待测样品(μL) 样品缓冲液(μL) 总体积(μL) 蛋白含量(μg)

0 0 0 20 20 0

1 1 0 19 20 2.0

2 2 0 18 20 4.0

3 4 0 16 20 8.0

4 8 0 12 20 16.0

5 12 0 8 20 24.0

6 16 0 4 20 32.0

7 20 0 0 20 40.0

样品1 0 X 补到20 20 未知

样品N 0 Y 补到20 20 未知

2．计算BCA工作液需要量：根据样品数量(包括制备标准曲线的样品的数量)和每个样品需要0.2mL BCA工作液的比例，计算所需BCA工作液的用量，然后加上10%损耗作为实际需要配制的量。例如：计算出需要5mL工作液，实际按不少于5.5mL的量配制。

3．配制BCA工作液：按50体积溶液A加1体积溶液B(50:1)的比例将二者充分混合，所得溶液即BCA工作液。比如：5mL溶液A+100μl溶液B。

注意：取用溶液A和溶液B前需要充分摇匀，溶液B非常容易形成沉淀，需要65℃加热溶解后才能使用。当把溶液B刚加入到溶液A中时，最初会出现淡绿色沉淀，轻微晃动沉淀即会消失，工作液最后成绿色，可以室温放置12 天，但需要将容器的盖子拧紧。

4．将10倍体积(即0.2mL)的BCA工作液加入到各孔中并混匀。如果用排枪加入并混匀则更好。也可把96孔板放在振荡器上振荡30秒混匀。

5．37℃放置30分钟。

6．冷至室温，10分钟内完成后续测定，否则化学反应还在继续进行，使光吸收值慢慢升高，每10分钟会升高2.5%左右。

7．在562nm下比色测定样品的光吸收。如酶标仪没有562nm的设定，可用接近的波长检测，如570nm。

8．将编号为0号的样品(对照)的读数从其余所有样品(包括0 号样品，其读数变成零)中扣除。

9．以0-7 号样品的BSA含量(μg，见上表最右行)为横坐标，以样品的吸光值为纵坐标，绘出BSA的标准曲线。

10．再将待测样品的吸光值(减去0 号样品的读数后的值)标在标准曲线上，其在横坐标上对应的蛋白含量(μg)就是待测样品中的蛋白质含量，除以样品稀释液总体积(20μl)，乘以样品稀释倍数即为样品浓度(μg/μL)。

二：试管测定模式

1、基本操作同上，只是操作改在编号的玻璃试管中进行，同时BSA 标准品(2ug/uL)的使用量从低到高改为0、5、10、20、40、60、80、100μL，样品的总体积从20μL 改为100μL，BCA工作液的用量从每个样品0.2mL 改为2mL。

三：注意事项

1．BCA法测定蛋白浓度时，吸光度会随着时间的延长不断加深。并且显色反应会因温度升高而加快。所以，如果蛋白质浓度较低，可以改在60℃孵育30分钟或更长。

2．待测样品浓度在20～2000 微克/毫升浓度范围内有较好的线性关系。

特别提示：本公司的所有产品仅用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！