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DOP-PCR试剂盒 ZY611109

Degenerate Oligonucleotide Primer PCR Kit

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DOP-PCR试剂盒

Degenerate Oligonucleotide Primer PCR Kit

产品及特点 DOP-PCR即简并寡聚核苷酸引物PCR,是扩增全基因组的方法之一,它利用中间含有6个随机碱基的22nt引物,通过两轮PCR(第一轮低温复性,第二轮高温复性)而将模板DNA扩增。DOP-PCR扩完整基因组的效率不如利用phi 29 DNA聚合酶的MDA,但在扩增高度降解的痕量DNA 方面具有巨大优势,在法医鉴定领域具有重要应用。本产品就是在DOP-PCR基础上进行优化而开发。

1. 专门用于高度降解的DNA,方便,含有除模板DNA和引物以外的所有成份,简化了准备工作。

2. 优化的引物浓度,使自连序列和非模板相关序列的合成。

3. 使用高保真酶,降低突变率。

4. 长度在300-1700bp 之间,平均500bp左右。

5. 模板基因DNA 用量一般为10-100pg。

6. 所得PCR产物可用于STR 多重扩增、比较基因组杂交、单染色体文库构建、基因组图谱研究等。

运输及保存 低温运输、-20℃保存,保存期限为12个月。不要反复冻融。

使用方法 

1.在一干净的PCR 管中,加入下列成分:

成分阴性对照样品
DOP-PCR MagicMix25μL25μL
基因组DNA模板(自备)或单个细胞不加10-100pg(或一个单个细胞)
DOP-PCR引物(20 pmol/μL)5μl5μl
补水到50μl50μl


2. 放入PCR仪中按下列参数进行DOP-PCR。

预变性95℃5min
第一轮PCR(12个循环)94℃1min
30℃1.5min
72℃(30℃升到72℃的时间设定为3分钟)3min
第二轮PCR(35个循环)94℃1min
62℃1min
72℃(每次循环后此步的保温时间延长14秒)2min
延伸72℃7min

4℃Forever


3.结束后取5-10μl直接上样电泳(不需要额外再加DNA上样液),红色染料电泳速度相当于50bp DNA片段。DOP-PCR产物的长度一般在300-1700bp之间。
4. 所得DOP-PCR产物可以用于后续PCR检测或其他分析。


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