F-DH5α快速转化感受态细胞

 基因型

F- φ80 lac ZΔM15 Δ(lacZYA-arg F) U169 endA1 recA1 hsdR17(rk

-

,mk

+

) supE44λ- thi -1 gyrA96 relA1 phoA

● 产品说明

DH5α 菌株是实验室最常用的感受态细胞。 缺失核酸内切酶 (endA)，提高了质粒 DNA 的产量和质量；重组酶缺陷型

(recA)减少插入片段的同源重组概率，保证了插入 DNA 的稳定性；lacZΔM15 的存在使 DH5α 可用于蓝、白斑筛选。

F-DH5α 感受态细胞经特殊工艺制作，无需 42℃热激，37℃孵育步骤，只需冰浴，10min 内完成转化、涂板操作，pUC19

质粒检测转化效率可达 1~5×108 cfu/μg DNA。

● 快速转化操作方法 (10min)

1. 提前 15 分钟将用到的筛选培养基平板拿到 37℃预热。

2. F-DH5α 感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5 分钟后待菌块融化，加入目的 DNA（质粒或连接产物）并用手拨

打 EP 管底轻轻混匀,，冰中静置 5 分钟。

3. 用 200ul 枪将感受态细胞-DNA 混合物转移到已经 37℃预热的 LB 培养基上，涂均匀，表面无水渍。

4. 将平板倒置放于 37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作，将平板放 37℃培养至少 15h。

● 快速热激转化操作方法 (25min,可提高转化效率)

1. F-DH5α 感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5 分钟后待菌块融化，加入目的 DNA (质粒或连接产物)并用手拨打

EP 管底轻轻混匀,，冰中静置 5 分钟。

2. 42℃水浴热激 45 秒，迅速放回冰上并静置 2 分钟 (晃动会降低转化效率)。加入 700 μl 不含抗生素的 LB，37℃，200

rpm 复苏 10 分钟，涂板 (均匀，表面无水渍)。

3. 将平板倒置放于 37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作，将平板放 37℃培养至少 15h。

● 注意事项

1. F-DH5α 快速转化感受态细胞也可进行热激操作，对于>7 kb 质粒的构建，为了提高转化效率可按以下步骤操作：FDH5α 感受态细胞从-80℃拿出，插入冰中，5 分钟后，加入目的 DNA 并用手拨打 EP 管底轻轻混匀，冰中静置 20

分钟。42℃水浴热激 45 秒，迅速放回冰中静置 2 分钟。加入 700 μl LB，37℃，200 rpm 复苏 30 分钟，涂板。

2. 感受态细胞最好在冰中缓慢融化。插入冰中 8 分钟内加入目标 DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低

转化效率，混入目的 DNA 时应轻柔操作。

3. F-DH5α 快速转化感受态细胞涂氨苄/羧苄青霉素抗性平板时效率较高，若涂卡那霉素或其他抗生素平板，转化效率下

降(因无孵育步骤，卡那霉素等对菌体毒性较大)。若要提高卡那霉素或其他抗性质粒的转化效率，可增加孵育步骤。

本产品仅供科研使用.请勿用于医药,不能用于临床治疗诊断使用！