C58C1 Chemically Competent Cell

● 基因型

Agrobacterium rhizogenes (str

R,rif

R ) pRiA4b (agropine type)

● 产品说明

发根农杆菌是根瘤菌科(Rhizobiaceae)农杆菌属(agrobacterium)的一种革兰氏阴性土壤细菌，它能够

感染大多数双子叶植物和少数单子叶植物以及个别裸子植物。C58C1 发根农杆菌菌株含有 pRiA4b 农

杆碱型 Ri 质粒，具有广泛的宿主范围（蔷薇科，夹竹桃科，豆科，茄科，黄芩，烟草等），同时具有

链霉素，利福平抗性。本公司生产的 C58C1 化学转化感受态细胞经特殊工艺制作，pCAMBIA2301 质

粒（卡那霉素抗性）检测，转化效率>104 cfu/μg DNA。

● 常规操作方法

1.取-80℃保存的 C58C1 发根农杆菌感受态于室温或手心片刻待其部分融化，处于冰水混合状态时

插入冰中。

2. 每 100μl 感受态加入 0.01-1 μg 质粒 DNA（转化效率较高，第一次使用前最好做预实验确定所

加质粒的量），用手快速、剧烈拨打管底混匀或用枪吹吸混匀，依次放于冰中静置 5 分钟、液氮 5 分

钟、37℃水浴 5 分钟、冰浴 5 分钟。

3. 冰浴中拿出放室温，加入 700μl 无抗生素的 TY液体培养基，于 28℃振荡培养 2 小时。

4. 6000 rpm 离心一分钟收菌，留取 100 μl 左右上清轻轻吹打重悬菌块涂布于含相应抗生素的

TY 平板上，倒置放于 28℃培养箱培养 2-3 天

● 农杆菌相关抗生素配方：

抗生素 配方 原液 工作液

羧苄青霉素 (carb) 双蒸水溶解，0.22 μm 滤膜过滤除菌 50 mg/ml 50 μg/ml

硫酸卡那霉素 (kan) 双蒸水溶解，0.22 μm 滤膜过滤除菌 50 mg/ml 50 μg/ml

链霉素 (strep) 双蒸水溶解，0.22 μm 滤膜过滤除菌 10 mg/ml 50 μg/ml

利福平 (rif) DMSO 溶解，0.22 μm 滤膜过滤除菌 10 mg/ml 20 μg/ml

庆大霉素 (gent) 双蒸水溶解，0.22 μm 滤膜过滤除菌 20 mg/ml 40 μg/ml

氯霉素（cam） 无水乙醇溶解，0.22 μm 滤膜过滤除菌 34 mg/ml 34 ug/ml

● 常用发根农杆菌抗性： (R：抗；S：敏感。)

农杆菌菌株 羧苄青霉素(carb) 链霉素(strep) 利福平(rif) 氯霉素(cam) 硫酸卡那霉素(kan)

Ar.A4 S S S S R

MSU440 S R S S S

Ar.Qual S R S R S

C58C1 S R R S S

ATCC15834 S S S S S

K599 S R S S S

Ar.1193 S R R S S

● TY 配方（1L）：

Tryptone 5g

Yeast extract 3g

补水到 1L 体积，完全溶解后，121 度、20 分钟高温灭菌

配制 1M 的氯化钙水溶液，121 度、20 分钟高温灭菌

每 1L 灭菌的 TY液体营养液中加入 10ml 无菌的 1M 氯化钙水溶液即可。

若配制 TY固体培养基，则加入 15g 琼脂粉。

● 注意事项

1. 加入质粒时体积不应大于感受态体积的 1/10；质粒不纯或存在乙醇等有机物污染，转化效率急剧下降；质粒增

大一倍，转化效率下降一个数量级。

2. 混匀质粒时应用手指快速拨打管底或用枪吹吸混匀，务必使质粒快速、均匀分散开，与感受态细胞充分接触。

转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。

3. 平板上阳性克隆密度过大时，由于营养不足，阳性克隆生长变慢，菌落变小，为了获得大的菌落，应减少质粒

用量或降低涂板的菌量。

4. C58C1 具有链霉素、利福平抗性，不可用于具有链霉素抗性或利福平抗性质粒的转化

本产品仅供科研使用.请勿用于医药,不能用于临床治疗诊断使用！