Ar.A4 Electroporation-Competent Cell

● 基因型

Agrobacterium rhizogenes(kanR) Ar A4 Ri(agropine type)

● 产品说明

发根农杆菌是根瘤菌科(Rhizobiaceae)农杆菌属(agrobacterium)的一种革兰氏阴性土壤细菌，它能够感染大

多数双子叶植物和少数单子叶植物以及个别裸子植物。Ar.A4 发根农杆菌菌株含有农杆碱型 Ri 质粒，具有广

泛的宿主范围（玉米，烟草，胡萝卜，甘草等），同时具有卡那霉素抗性。开发的 Ar.A4 发根农杆菌

电转感受态特别适用于大质粒的转化：经 pK7WGF2 质粒 (size:11876 bp)检测转化效率>105 cfu/μg DNA；

经 pK7WGF2-ZH 质粒（size:40 kb）检测转化效率可达 5×103 cfu/μg DNA。

● 常规操作方法

1. 0.1 cm 电击杯和杯盖从储存液中拿出倒置于干净的吸水纸上 5 分钟，待其沥干水分，正置 5 分钟，使乙

醇充分挥发，待乙醇挥发干净立即插入冰中，压实冰面，电极杯顶离冰面 0.5 cm以方便盖上杯盖，冰中静

置 5 分钟充分降温。

2. 取-80℃保存的农杆菌感受态插入冰中 5 分钟，待其融化，加入 0.01-1 μg 质粒 DNA（体积不大于 6ul，

最好用试剂盒抽提，双蒸水溶解；转化效率较高，第一次使用前最好做预实验确定所加质粒的量），用手拨

打管底混匀，立即插入冰中，用 200 μl 枪头将感受态-质粒混合物快速移到电击杯中，盖上杯盖，空管保留

待用。

3. 启动电转仪，设置参数：C=25 μF，PC=200 ohm，V=2400 V（此参数为 Biorad 推荐，使用者也可按所

用电转仪推荐的 protocol 操作），将电击杯从冰中拿出，吸水纸吸干外表面水份，快速放入电转槽中，启动

电击，电击完成快速插入冰中，加入 1 ml 无抗生素的 TY，并转移到感受态空管中，28℃振荡培养 2~3 小

时。

4. 6000 rpm 离心一分钟收菌，留取 100 μl 左右上清轻轻吹打重悬菌块涂布于含相应抗生素的 TY平板上，

倒置放于 28℃培养箱培养 2-3 天

● 农杆菌相关抗生素配方：

抗生素 配方 原液 工作液

羧苄青霉素 (carb) 双蒸水溶解，0.22 μm 滤膜过滤除菌 50 mg/ml 50 μg/ml

硫酸卡那霉素 (kan) 双蒸水溶解，0.22 μm 滤膜过滤除菌 50 mg/ml 50 μg/ml

链霉素 (strep) 双蒸水溶解，0.22 μm 滤膜过滤除菌 10 mg/ml 50 μg/ml

利福平 (rif) DMSO 溶解，0.22 μm 滤膜过滤除菌 10 mg/ml 20 μg/ml

庆大霉素 (gent) 双蒸水溶解，0.22 μm 滤膜过滤除菌 20 mg/ml 40 μg/ml

氯霉素（cam） 无水乙醇溶解，0.22 μm 滤膜过滤除菌 34 mg/ml 34 ug/ml

● 常用农杆菌抗性： (R：抗；S：敏感。)

农杆菌菌株 羧苄青霉素(carb) 链霉素(strep) 利福平(rif) 氯霉素(cam) 硫酸卡那霉素(kan)

Ar.A4 S S S S R

MSU440 S R S S S

Ar.Qual S R S R S

C58C1 S R R S S

ATCC15834 S S S S S

K599 S R S S S

Ar.1193 R R R S S

● TY 配方（1L）：

Tryptone 5g

Yeast extract 3g

补水到 1L 体积，完全溶解后，121 度、20 分钟高温灭菌

配制 1M 的氯化钙水溶液，121 度、20 分钟高温灭菌

每 1L 灭菌的 TY液体营养液中加入 10ml 无菌的 1M 氯化钙水溶液即可。

若配制 TY固体培养基，则加入 15g 琼脂粉。

● 注意事项

1. 加入质粒时体积不应大于感受态体积的 1/10；质粒不纯或存在乙醇等有机物污染，转化效率急剧下降；质粒

增大一倍，转化效率下降一个数量级。

2. 电转感受态细胞中不可混入气泡，转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。

3. 平板上阳性克隆密度过大时，由于营养不足，阳性克隆生长变慢，菌落变小，为了获得大的菌落，应减少质

粒用量或最终用于涂板的菌量。

4. Ar.A4 具有卡那霉素抗性，不可用于具有卡那霉素抗性质粒的转化。

本产品仅供科研使用.请勿用于医药,不能用于临床治疗诊断使用！