R5421感受态细胞

英文名：R5421 Chemically Competent Cell

储存条件：-80°C

CAS：N/A

级别：N/A

分子式：N/A

分子量：N/A

纯度：N/A

产品储存：-80 ℃保存，一年有效。

产品组成：

基因型：

MATα ura3-52 leu2 trk1Δ his3Δ200 his4-15 trk2Δ1 :: pCK64

产品说明：

  R5421酿酒酵母菌株为K+/钾离子缺陷型菌株，在文献中也称为CY162，MATα型，多用于 K+/钾离子转运蛋白的鉴定试验中，也可用于K+/钾离子通道或钠钾离子泵的鉴定试验。Transformation marker为：ura3，leu2，该菌株可以在含有100mM KCl的培养基中能正常生长，在含有5-10mM KCl的培养基中生长缓慢，当培养基中KCl浓度低于0.5 mM，R5421（CY162）细胞停止生长。R5421感受态细胞经特殊工艺制作，-80 ℃可保存六个月，pGADT7质粒检测转化效率>103 cfu/μg DNA。

使用方法：

1. 取R5421感受态细胞100 µL于冰上融化的，依次加入预冷的目的质粒2-5 µg，Carrier DNA (95-100 ℃，5 min，快速冰浴，重复一次) 10 µL，PEG/LiAc 500 µL并吸打几次混匀，30 ℃水浴30 min (15 min时翻转6-8次混匀)。

2. 将管放42 ℃水浴15 min (7.5 min时翻转6-8次混匀)。

3. 5000 rpm离心40 s弃上清，ddH2O 400 µL重悬，离心30 s弃上清。

4. ddH2O 50 µL重悬，涂板，29 ℃培养48-96 h。

注意事项：

1. 感受态细胞最好在冰上融化。

2. 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。

3. 同时转化2-3种质粒时可增加质粒的用量。

4. R5421酵母菌株对高温敏感，最适生长温度为27-30 ℃；高于31 ℃，生长速度和转化效率呈指数下降。

5. 菌落变粉不是污染，是酵母细胞生长中一个常见现象。当细胞在平板培养几天后，平板上的Adenine被酵母消耗完毕，酵母试图通过自身代谢途径合成Adenine以供利用，然而，有些菌株的ADE2基因被破坏，Adenine合成途径受阻；又由于其ADE4,5,6,7,8基因均正常，所以造成中间产物P-ribosylamino imidazole (AIR)在细胞中积累而使菌落变为粉红色。

6. 酵母在缺陷培养基中生长速度比YPDA培养基慢，培养基中缺陷成分越多，生长越慢，以转化涂板为例：涂YPDA平板29 ℃，48 h培养可见直径1 mm克隆；涂SD单缺平板29℃，48-60 h培养可见直径1 mm克隆，涂SD双缺平板 29℃，60-80 h 培养可见直径1 mm克隆，涂SD三缺或四缺平板平板29 ℃，80-90 h培养可见直径1 mm克隆。

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