GS115感受态细胞(化转)

英文名：GS115 Chemically Competent Cell

储存条件：-80℃

CAS：N/A

级别：N/A

分子式：N/A

分子量：N/A

纯度：N/A

产品储存：-80 ℃保存，6个月有效。

产品组成：

注：本菌株的基因型为His4，表型是Mut+。

产品说明：

  GS115是毕赤酵母菌株，属于真核细胞。一般的针对原核生物的抗生素例如卡那和氨苄对酵母是无效的，因此为了防止大肠杆菌等原核生物对酵母培养菌株污染，往往会在培养基中加入一些氨苄和卡那霉素的抗生素，来抑制细菌菌的污染和生长。GS115毕赤酵母自身表型为Mut+，但是GS115转化株既能够产生出Mut+菌株，也能够产生出Muts菌株。目的蛋白在这两种转化株的表达水平可能是不同的，并且具有不可预测性，所以只有通过实验才能得到最好的酵母表达方案。

  毕赤酵母适宜的生长温度是28至30度，温度超过32度对蛋白的表达是有害的，并可能导致细胞的死亡。GS115毕赤酵母是是组氨酸缺陷型（His4基因型），如果表达载体上携带有组氨酸基因，可补偿宿主菌的组氨酸缺陷，因此可以在不含组氨酸的培养基上筛选转化子。这些受体菌自发突变为组氨酸野生型的概率一般低于10-8。GS115毕赤酵母可以在YPD培养基中生长，或者在补充有组氨酸的minimal media中生长，但是无法在单独的minimal media培养基中生长。质粒转化毕赤酵母GS115的菌株的方法有很多，如电转化、化学转化等。根据实验方法的不同，用的试剂和培养基有所不同。本手册提供一个化学转化方法。

使用方法：

1. 取0.1-5 μg质粒DNA（线性化质粒加入量5-50 μg）和10 μL预变性Carrier DNA，加入到未融化的100-200 μL感受态细胞上，置于30 ℃水浴，每隔15 S颠倒混匀，直至感受态细胞刚好完全融化（融化后及时取出）。

2. 加入1.4 mL B2溶液颠倒混匀。30 ℃水浴60 min，每隔20 min颠倒混匀

3. 3,000 rpm离心3 min弃上清留菌体沉淀，加入1 mL B3溶液重悬菌体。

4. 3,000 rpm 离心3 min 弃上清留菌体沉淀，加入100 μL B3溶液重悬菌体。

5. 将100 μL菌液全部涂布到相应的平板培养基，30 ℃恒温培养3-5天，直至平板出现酵母克隆。

注意事项：

1. 初次使用Carrier DNA，请把装有Carrier DNA的管子在沸水中煮沸5 min，然后立即放在冰上，用后放在-20 ℃储存备用。下次使用前请于冰上解冻Carrier DNA。反复冻融3-5次后需重新变性Carrier DNA。

2. 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。 

3. 同时转化 2-3 种质粒时可增加质粒的用量。

4. 毕赤酵母适宜的生长温度是28至30度，温度超过32度对蛋白的表达是有害的，并可能导致细胞的死亡。

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