VL6-48感受态细胞

英文名：VL6-48 Chemically Competent Cell

储存条件：-80℃

CAS：N/A

级别：N/A

分子式：N/A

分子量：N/A

纯度：N/A

产品储存：-80 ℃保存，6个月有效。

产品组成：

基因型:

MAT alpha, his3-D200, trp1-D1, ura3-52, lys2, ade2-101, met14, psi+cir0

产品说明：

  高转化效率酿酒酵母VL6-48（(ATCC no.MYA-3666)因TRP1基因缺失而不能在Trp缺陷培养基中生长。因此，TRP1基因可用作一个选择标记。对该菌株，HIS3基因也可作为选择标记。URA3基因作为标记，不推荐直接做克隆实验，尽管该菌株是URA3基因缺陷(The URA3 gene on its chromosome is inactivated but not deleted, and thus unwanted recombination occurs at relatively high frequency between chromosomal URA loci and the URA gene on the vector)。

使用方法：

1.取100 µL冰上融化的VL6-48感受态细胞，依次加入预冷的目的质粒2-5 µg，Carrier DNA(95-100 ℃，5min，快速冰浴，重复一次)10 µL，PEG/LiAc 500 µL并吸打几次混匀，30℃水浴30 min (15 min时翻转6-8次混匀)。

2.将离心管放42℃水浴15 min (7.5 min时翻转6-8次混匀)。

3.5000 rpm离心40 s弃上清，ddH2O 400 µL重悬，离心30 s弃上清。

4.ddH2O 50-100 µL重悬，涂板，29℃培养48-96 h。

注意事项：

1.感受态细胞最好在冰上融化。

2.转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。

3.同时转化2-3种质粒时可增加质粒的用量。

4.一般酿酒酵母菌株对高温敏感，最适生长温度为27-30℃；高于31℃，生长速度和转化效率呈指数下降。

5.菌落变粉不是污染，是酵母细胞生长中一个常见现象。当细胞在平板培养几天后，平板上的Adenine被酵母消耗完毕，酵母试图通过自身代谢途径合成Adenine以供利用，然而，有些菌株的ADE2基因被破坏，Adenine合成途径受阻；又由于其ADE4,5,6,7,8基因均正常，所以造成中间产物P-ribosylamino imidazole (AIR)在细胞中积累而使菌落变为粉红色。

6. 酵母在缺陷培养基中生长速度比YPDA培养基慢，培养基中缺陷成分越多，生长越慢，以转化涂板为例：涂YPDA平板29℃，48 h培养可见直径1 mm克隆；涂SD单缺平板29℃，48-60 h培养可见直径1 mm克隆。

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