拟南芥营养液（干粉+浓缩液）

英文名：Arabidopsis thaliana nutrient salts

储存条件：2-8℃

出品的拟南芥营养液（干粉+浓缩液），也有实验室称为PNS营养液，分为干粉和浓缩液两个部分，称取0.36g干粉溶解于1L蒸馏水中，完全溶解后再加入1mL钙浓缩液，混匀即为pH值5.7的营养液，无需调整pH值。该产品易储存运输，配置方便快捷。

英文名称：Arabidopsis thaliana nutrient salt mixture

产品性状：白色至淡黄色粉末

工作浓度：水溶解，干粉359.295mg/L，加1ml/L 1000×钙浓缩液。

运输条件：常温运输

储存条件：2-8℃，密封储存

特别说明：该产品不适宜制备高浓度母液，会有沉淀产生。

产品组成：（mg/L）

使用方法：

1.根据用量，称取干粉混合物加入相应体积的蒸馏水内，完全溶解后加入适量钙浓缩液，混匀。

2.本品配制完成后pH为5.7±0.2，无需调整。如有特殊要求，可根据要求调整pH值。

3.施入配制好的营养液。

注意事项：

1.大量元素低温储存可能会有析出情况，恢复常温完全溶解即可使用。

2.三种母液不要同时加入，避免产生沉淀。

拟南芥培养方法：

    拟南芥生长的适宜温度白天为22℃-24℃，夜温20-22℃，适宜的湿度为60-70%，生长期适宜的光强为150μmol• S-1• M-2(6支36 W日光灯下35cm处测得）。幼苗期不耐高光强，可适当遮荫。光质也较重要，应选用植物生长专用的日光灯。拟南芥属于长日照植物，在日照长于12小时下才会开花，一般拟南芥生长室的日照长度定于14-16h为佳。

2．种子消毒：种子放在1.5mL离心管中，加入1 mL的种子消毒液（2% NaClO（市售10%溶液）和0.1% Triton-X100），消毒10 min（移液器反复吸吹），用无菌水洗5次以上（移液器反复吸吹）。

3．点种：种子里可多加些水，用移液器吸取种子，均匀铺到培养皿上，可根据需要选择种植的密度（一般不超过30株，不要太密，否则根缠在一起不好移苗），用移液器吸除培养基表面上的水，并置于超净台内吹干培养皿表面上的水，密封盖子，4℃暗处理两天后（春化），移到光照培养箱（22 ℃，光周期12 h)，两周后再移苗。若种子较密，光照培养箱中生长1周则要移苗，且需适当遮荫。

4．移苗：将蛭石与珍珠岩按3:1的比例混好作为基质，装入营养钵，将营养钵放入不透水的平底塑料育苗盘，在育苗盘中加水至3 cm高，水就会通过营养钵的底孔渗入，待基质湿透即可移苗。用镊子轻轻从培养皿中连根拉出小苗，把根平放在蛭石表面，用镊子把根轻轻压入基质内，移苗后用保鲜膜覆盖营养钵3-4天。从苗期直至开花，每隔2-3天浇一次水，始终保持育苗盘内有1-3 cm的水层，整个生长期浇3-4次拟南芥营养液。在收种期，不要浇水，保持育苗盘干燥。

5．收种：在种荚变黄，变干时收种。将种子抖落容器内，收集后用筛网除去杂质，将种子装入小纸袋中，标记好，置于干燥的环境中待种子进一步干燥后，封存于1.5mL离心管。

拟南芥的转化方法：

    渗透培养基配制：2.29g/L 1/2MS（大量元素减半）；5% 蔗糖；0.5% MES；用KOH调至pH5.7；再加：10 μl/L的6-BA母液(1 mg/mL，乙醇溶解)；200 μl/L Silwet L-77(在蔗糖溶解后加入，否则蔗糖很难溶解)。经转化的拟南芥，种子收获后需在相应的抗性平板上筛选转化子。

1、制备好已转化了相应质粒的农杆菌菌液10 mL，转入200 mL大瓶过夜培养，农杆菌液在1.2-1.6即可。

2、室温5000 rpm离心15分钟。

3、弃上清，将农杆菌沉淀悬浮于相应体积的渗透培养基里，OD600在0.8左右为宜。

4、直接将拟南芥的花浸入农杆菌悬浮液，持续几秒钟，取出再浸入，反复3-5次。浸染后的植株平放在带有盖子的育苗盘中，或者用保鲜膜盖好，以保持湿度。移入恒温室避光培养24小时，第二天揭膜，正常光照培养。

转化子的筛选：

1、种子消毒：用种子消毒液（2% NaClO和0.1% Triton-X100）处理10分钟（移液器反复吸吹）；然后用无菌水洗5次（移液器反复吸吹）。

注意：消毒时间不宜过长，否则影响种子发芽。

2、处理后的种子用移液器均匀涂布在固体筛选培养基表面。不宜过密，切忌将种子堆叠在一起。如种子特别容易污染，可在固体筛选培养基中加入工作浓度为250 μg/mL的头孢霉素抑制农杆菌的生长。

3、4℃避光春化2到3天，移入22℃恒温箱培养。

4、观察种子在固体筛选培养基上生长情况, 相比于其他萌发的幼苗，具有长根的幼苗可确定为转化子时，将转化子移栽至浇透拟南芥营养液的人工基质上培养。

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