4M氯化锂溶液（RNase Free）

英文名：4M lithium chloride solution(RNAse free)

储存条件：RT

CTAB(hexadecyltrimethylammonium bromide,十六烷基三甲基溴化铵)，是一种阳离子去污剂,具有从低离子强度溶液中沉淀核酸与酸性多聚糖的特性。在高离子强度的溶液中(0.7mol/L NaCl),CTAB与蛋白质和多聚糖形成复合物，只是不能沉淀核酸.通过有机溶剂抽提，去除蛋白、多糖、酚类等杂质后加入乙醇沉淀即可使核酸分离出来。

使用方法：

一、试剂准备

1、氯仿-异戊醇混合液(24:1)。96mL氯仿加4mL异戊醇混匀（自备或购买套装）。

2、65℃预热CTAB提取液。每15mL CTAB提取液加入 300uL的还原剂。

3、无水乙醇。

二、操作步骤（需要两天时间）

1、离心管中加入15mL预热的CTAB提取液（已加入300uL还原剂）。

2、液氮研磨2-3 g 植物组织，转移到CTAB提取液中，涡旋震荡1min 后置于65℃ 水浴中 5 min。

3、水浴完成后冷却2min，加入15 mL的氯仿-异戊醇混合液，剧烈震荡混匀。9,000 rmp离心15 min。

4、取上步离心管中上清液到新的离心管中，加入15 mL的氯仿-异戊醇混合液，剧烈震荡混匀。9,000 rmp离心15 min。

5、取上步离心管中上清液到新的离心管中，加入等体积的4M LiCl（终浓度2M），4℃沉淀过夜（12-16h）。

6、9,000 rmp，4℃离心60 min沉淀RNA，弃上清。

7、在沉淀中加入500 uL的70% 乙醇洗涤沉淀，9,000 rmp离心10 min，弃上清。

8、在沉淀中加入500uL的SSTE溶解沉淀，转移至1.5mL的离心管中，加入500uL的氯仿-异戊醇混合液，震荡混匀，12,000 rmp离心1min，将上清小心转移至新的离心管中。

9、在上清中加入1/10体积的3M 乙酸钠溶液，2倍体积的无水乙醇，置于-20℃沉淀2h或-80℃沉淀30min。

10、沉淀用400uL 的70%乙醇洗涤沉淀，12,000 rmp离心5min，小心吸弃上清，再加入400uL无水乙醇（无需吹打），12,000 rmp离心5min后，小心吸弃上清。

11、乙醇挥发，RNA干燥后加入50-100 uL DEPC水溶解RNA。电泳检测后置于-80℃保存。

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