真菌RNA提取试剂盒

英文名：Fungal RNA Extraction Kit

储存条件：2-8℃

真菌RNA快速提取试剂盒适用于各种形态和各个种属的真菌及革兰氏阳性细菌，包括 Candida albican、Saccharomyces cerevisiae、 Schizosaccharomycespombe、Pichiapastoris、Bacillus subtilis、Staphylococcusaureus 等。

自备试剂：

氯仿

（一）菌体裂解：

1.将 50 mg 的干菌丝(或 100 mg的鲜菌丝、或适当数量的真菌菌落)转移到 1.5 mL 离心管中。对于液体真菌培养物，在1.5mL离心管中多次离心收集1-10 mL 的菌体沉淀。

2.在菌体沉淀中加入 0.4 mL 裂解液I震荡混匀。

注：如果裂解液I存放时产生沉淀，请置于 65℃融化后使用。

3.加入 0.4 mL裂解液II，剧烈震荡 30 s后65℃水浴 5 min。

4.12,000-15,000 rpm 离心3 min ，转移上清到1.5 mL离心管中。

5.在上清中加入0.1 mL 的裂解液II和0.1mL氯仿（自备）震荡 30 s混匀。 

6.  12,000-15,000 rpm 离心3 min ，转移上清到5 mL 离心管中。

（二）RNA收集：

1.  在步骤（一）所得的上清中加入3倍体积（约1.5 mL ）的结合液III和1倍体积（约0.5 mL）的结合液IV，颠倒数次混匀后，分多次上RNA吸附柱，每次上柱后均先室温放置 2 min，然后 12,000 rpm 离心 1 min，倒掉穿透液。

2.  在吸附柱中加入500 μL洗涤液，12,000 rpm离心1 min，弃穿透液。

3.  再将吸附柱12,000 rpm离心30 s以甩干乙醇。

4.  将吸附柱放入一个干净的1.5 mL离心管中。在吸附柱中央加入50 μL洗脱液，室温静置2 min。

5.  12,000 rpm离心2 min。离心管中溶液即为 RNA 样品，可以立即使用或存放于-80℃待用。

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