Otto buffer I

英文名：Otto buffer I

储存条件：2-8℃植物的核DNA含量和倍性水平是植物学研究中重要的基础研究指标。流式细胞术的应用，提高了植物核DNA含量检测的准确度和检测速度。
只通过物理方法即切碎叶片往往不能获取大量完整的细胞核，还需加入特定的解离液，使植物细胞破碎，分散细胞器，进而解离出细胞核。同时解离液还可以防止细胞间相互粘连，抵消次生代谢物带来的消极影响，并维持一定的渗透压，保证细胞核的完整性。
  产品说明：（使用举例）
Otto两步法：
1. 分别取内标植物和黄芩叶片约1cm2放到培养皿中，加入4℃保存备用的OttoⅠ提取液1mL，用锋利的单刃刀片垂直快速切碎叶片；
2. 混匀后用枪头吸取提取液经30um的滤头过滤到1.5mL的离心管中，4℃、1000g离心5min，小心吸弃上清；
3. 加入500uL Otto II溶液（临用前加入0.02mg/mL RNase A+0.02mg/mL PI）备用。
LB01一步法（其他解离液参照此解离步骤）：
1. 同两步法取材后，加入分装解冻后的LB01提取液1mL，快速切碎和过滤得细胞核悬液；
2.在上机测试前约5min，每管加入20uL的RNase储存液（1mg/mL）和20uL的PI储存液（1mg/mL）。
   注意：上述操作中，刀片要锋利，材料要浸入提取液，垂直快速切碎，解冻的PI和加入PI的细胞核悬液，均需要冰上低温避光保存，每个样品需要3个重复。
荧光染料选择：
   Hoechst 33342，Hoechst 33258和DAPI属于非嵌入式染料，主要结合在DNA的A-T碱基区，因此此类染料不适合于检测基因组绝对值，实际测量值偏小。但是可以获得高分辨率的柱状图，可以用于倍性水平检测。
PI，EB，AO为嵌入式染料，在检测核DNA的含量前，需要先降解RNA，排除双链RNA的干扰，此类染料只能染死细胞，也可以用来区分活死细胞。

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