酵母蛋白提取试剂盒（变性）

英文名：Yeast Total Protein Extraction Kit

储存条件：RT

储存条件：RT，未开封有效期24个月。

产品介绍：

  本产品通过使用玻璃珠震荡法，结合化学裂解法破碎酵母细胞壁，适用于多种酵母菌的培养物（包括菌液或平板菌落）。提取的酵母总蛋白可用于SDS-PAGE凝胶电泳及免疫印迹（Western Blot）实验。本产品提取蛋白为变性蛋白，不能用于蛋白活性检测等相关实验。

准备步骤：

  将提取液成分II全部加到提取液成分I中，充分混匀作为提取液备用，未用部分-20 ℃冻存。

操作步骤：

1. 5,000 rmp，4 ℃离心5 min收集酵母菌液细胞沉淀（酵母菌液OD值0.5-2.0）。

2. 加入1 mL洗涤液震荡混匀，5,000 rmp，4 ℃离心5 min沉淀酵母细胞，弃上清。

3. 用100 μL提取液悬浮酵母细胞，并快速转移到1.5 mL离心管中，95-100 ℃金属浴或水浴3 min。

4. 加入0.2 g玻璃珠，旋涡震荡器上剧烈震荡5-10 min。

5. 用移液器或者巴斯德吸管回收提取液。

6. 剩余玻璃珠的离心管中再次加入100 μL提取液，稍加震荡，再次回收提取液。

7. 合并两次提取液即为酵母总蛋白样品。

8. （可选步骤）12,000 rmp，4 ℃离心15 min，上清含可溶性蛋白质，沉淀含不溶性蛋白质。

9. 总蛋白样品于95-100 ℃金属浴或水浴1 min，可直接用于SDS-PAGE电泳（无需添加Loading buffer）。

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