质谱兼容型蛋白银染试剂盒

英文名：Mass Spectrometric Compatible Protein Silver Stain Kit

储存条件：RT

储存条件：4℃保存，保质期 2 年。

产品内容： 

实验准备：（每个溶液均需要新鲜配置）

1.固定液：400mL/次。自备。

160mL甲醇 40mL乙酸 200mL去离子水

2.浸泡液A：200mL/次。

60mL甲醇 8mL A液 一瓶A干粉（每次一瓶） 132mL去离子水

3.染色液B：200mL/次。

1mL B液（染色浓缩液，200×） 199mL去离子水

4.显色液C：200mL/次。

1瓶C干粉（每次一瓶） 200mL去离子水 160µL 的C液（临用前加）

5.终止液D：200mL/次。

1瓶D干粉（每次1瓶） 200mL去离子水

银染步骤：

1.PAGE电泳（包括非变性PAGE，SDS-PAGE，尿素-PAGE，2D-PAGE，IEF-PAGE等）结束后，将PAGE胶转移到装有200 mL固定液的瓷盘或玻璃盘中，摇晃30分钟以去除干扰银染的组分（如甘氨酸、SDS、尿素、DTT、甘油等），倒掉固定液。注：此步很重要，否则银染背景很高。

2.重复上步一次。

3.将PAGE胶转移到200 mL浸泡液A中，室温摇晃30分钟。

4.用200 mL去离子水漂洗3次，每次5分钟（不要延长或缩短）。

5.将PAGE胶转移到200 mL的染色液B中，室温摇晃20分钟。

6.用200 mL去离子水漂洗2次，每次1分钟（不要延长或缩短）。

7.将PAGE胶转移到200 mL的显色液C中，室温摇晃直到蛋白电泳条带显现（一般需要10分钟左右）。

8.将PAGE胶转移到200 mL终止液D中，室温摇晃终止反应。

9.用200 mL去离子水漂洗3次，每次5分钟（不要延长或缩短）。

10.切下条带或胶块进行后续的脱银，原位trypsin酶解，多肽沉淀和MS分析（略）。

MS前处理步骤（仅供参考）：

1. 脱银：将切下的银染斑点或条带用脱银液（30 mM K3Fe（CN）3和100 mM Na2S2O3的1：1的混合液）处理直到黑色消失。

2. 还原：将胶块或胶条置于10 mM DTT（溶剂为50 mM NH4HCO3），56℃处理一小时。

3. 烷化：将胶块或胶条置于55 mM 碘乙酰胺（溶剂为50 mM NH4HCO3），室温避光处理45分钟。

4. 原位trypsin酶解：将胶块或胶条置于10 ng/uL测序级别的trypsin溶液中（溶剂为25 mM NH4HCO3），37℃处理过夜。

5. 多肽提取：用5%三氟乙酸抽提酶解液，再用2.5%三氟乙酸-50%ACN混合液抽提酶解液，上清真空干燥，沉淀（多肽）最后溶于0.5%三氟乙酸中。

6. MS分析：参考相关MS仪器使用手册。

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