非变性PAGE制胶及电泳试剂盒（常规蛋白）

英文名：Non-denatured PAGE Gel Preparation Kit

储存条件：2-8℃

注意：

1.过硫酸铵（APS）为结晶性粉末，2-8 ℃储存，使用前每支加入1 mL蒸馏水即为10% APS溶液，现配现用最佳，溶液用后-20 ℃可储存2个月。APS如出现严重结块，即已变质。

2.将5×tris-甘氨酸电泳缓冲液（干粉）加入到900mL的蒸馏水中，搅拌溶解之后，定容到1L，即得5×电泳液，常温可保存半年。使用前用蒸馏水稀释到1×。

产品简介：

  本试剂盒提供非变性PAGE凝胶制备以及电泳全套试剂。可以根据需求配制各种浓度的非变性分离胶，同时提供4×非变性蛋白上样液（需-20℃保存）和5×非变性电泳缓冲液用以满足不同分子量的酸性蛋白电泳实验，无需再准备试剂，使用方便，经济实惠。如需小量制备多种浓度变性分离胶请选购SK6010产品。

操作步骤：（以0.75mm厚mini胶为例）

一、灌制分离胶

1．参照凝胶模具说明书，装配好模具。

2．取相应体积的30% Acr-Bis（29:1）、分离胶缓冲液和双蒸水（参照表1）在小烧杯或试管中混合。

3．加入10% APS溶液和TEMED，轻轻搅拌使其混匀，避免产生气泡。

4．注入模具（留少许以判断凝胶状态），避免产生气泡，凝胶混合液加至距前玻璃板顶端约1.5 cm或距梳齿0.5 cm，轻轻加入1 mL水覆盖封胶，使分离胶表面保持平整。

5．静置30-60分钟，待分离胶和水层之间出现一个清晰的界面后，表面凝胶已聚合。

二、灌制浓缩胶

1．倒掉覆盖在分离胶上的水层。

2．将相应体积的30% Acr-Bis（29:1）、浓缩胶缓冲液和双蒸水（参照表2）在一个小烧杯或试管中混合。

3．加入10% APS和TEMED，轻轻搅拌使其混匀，避免产生气泡。

4．将浓缩胶溶液加至分离胶的上面（留少许以判断凝胶状态，避免产生气泡，直至前玻璃板的顶端。

5．将梳子插入凝胶内，避免产生气泡。

6．静置30-60分钟，待凝胶聚合后，小心地拔出梳子，避免破坏加样孔。

7．进行常规电泳操作。使用Tris甘氨酸电泳液建议电泳条件：初始电压80V，约30分钟，样品进入分离胶后，电压调至120V，约1小时，样品抵达凝胶底部停止电泳。

注意事项：

1. APS溶液常温不稳定，取用后立即放回-20 ℃冰箱；若发现凝胶时间延长，应更换APS溶液。

2. PAGE凝胶的凝聚速度与温度以及APS、TEMED的用量密切相关；可通过增加50%-100% 的APS及TEMED的用量，加快PAGE凝胶的聚合速度，但凝胶聚合过快不利于操作。

3. 在凝胶配制过程中，尤其是液体混匀步骤，应尽量避免气泡的产生。

4. 在分离胶上层加蒸馏水时要小心操作，加水时速度不能太快。

5. 丙烯酰胺具有神经毒性，操作时请穿戴实验服和一次性手套。

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