彩虹预染超低分子量蛋白Marker（1.2-45 kD，6条带）

英文名：Pre dyeing low MW protein Marker

储存条件：-20℃

产品说明：

  彩虹预染超低分子量蛋白质Marker可以直接观察蛋白电泳及清晰判断Western Blotting的转膜效果。本产品包含3种多肽和3种低分子量蛋白质组成，分子量范围为1.2kD-45kD，分子量大小为1.2kD，4.6kD，10kD，16kD，27kD，45kD (注：蛋白大小已在18%Tricine-SDS-PAGE中用非预染蛋白Marker标定过）。

操作说明：

  第一次收到该产品，室温融化后，彻底混匀，离心快甩将溶液完全收集到管底，根据需要适量分装成小管，-20℃贮存，每次取一小管使用。

一、制胶

（一）配置分离胶

1．按照表一将不同体积的双蒸水，40%PAA(19：1),4×凝胶缓冲液和乙二醇加入到小烧杯中混合。

2．加入10%APS和TEMED,立即混匀5-10秒，以使溶液充分混匀。

3．在凝胶模具中迅速灌入适量分离胶溶液，然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层1-3cm的水层，使凝胶表明保持平整。

4．静置30-60分钟，待分离胶和水层之间出现一个清晰的界面表示凝胶已聚合。

（二）配置浓缩胶

去除覆盖在分离胶上的水层，用滤纸将残留的水吸去。

1.按照表一将不同体积的双蒸水，40%PAA(19：1)和凝胶缓冲液加入到小烧杯中混合。

2．加入10%APS和TEMED,立即混匀5-10秒，以使溶液充分混匀

3．将梳子插入凝胶内，避免产生气泡。

4．静置30-60分钟待凝胶聚合。  

表一（一块厚度0.75mm凝胶用量）

注：如非必须，不要使用1.0mm和1.5mm的凝胶，尽量使用厚度0.75mm的凝胶，这样会减少电泳后染色和脱色的时间

二、电泳

1、取一管分好的Marker样品，95℃处理5分钟，充分混匀后备用

2、将电泳槽的外槽加入1×阳极缓冲液，内槽加入1×阴极缓冲液，轻柔拨出梳子，将Marker或蛋白样品加入点样孔，80-120V电泳30-60分钟左右，待指示前沿到达离胶上沿时，把电压调至150-200V，至蓝色指示前沿至分离胶3/4位置时即可停止电泳，整个电泳过程大约需要2-3小时。（注：如果电泳时间过短，染色时，指示前沿容易遮挡小于5kd的小肽）

表二 小分子蛋白质SDS-PAGE电泳试剂配置

三、染色，根据常规染色

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