Klenow Fragment(exo-)
末端截短物,它保留了 DNA 聚合酶活性,但失去了 5´→3´核酸外切酶活性。该酶进一步经突变去除了其 3´→5´的核酸外切酶活性。因此该 DNA 聚合酶无任何外切酶活性,仅包含了 DNA 聚合酶活性,广泛用于标记探针制备、cDNA 第二条链的合成等建库试验。
单位定义一个活力单位即在 37°C 条件下,30 分钟内催化 10 nmoldNTP 的掺入反应成为酸不溶性物质所需的酶量。10×Klenow Buffer: 500 mM Tris-HCl (pH 8.0 at 25 °C), 50mM MgCl2, 10 mM DTT. 该酶兼容 PCR Buffer 和内切酶Buffer。
应用:(1)用随机引物制备探针(2)随机引物法标记(3)cDNA 第二条链的合成(4)该酶不能用于产物平端不齐失活:75°C,20min 失活。储存:-20℃可保存 3 年。随机引物生物素标记反应1. 按以下组分配制反应液
95°C 5min 冰上放置 5min。2. 聚合反应加入 1 μl Klenow Fragment(exo-),混合均匀。37°C 反应 15min,75°C 20min 失活。
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