组织细胞miRNA提取试剂盒

描述：生产的组织细胞 miRNA 提取试剂盒是目前世界上提取小 RNA（<200nt）操作步骤最简单、重复性最好、小 RNA 产率最高的方法。使用该试剂盒提取的小 RNA（Small RNA）中，长度在 15～200nt 范围的 RNA 在 95%以上，基本不含有大 RNA 和 DNA。使用该试剂通过一步上柱即可获得高纯度 miRNA，可在 45min 内完成小 RNA 的提取。该试剂盒广泛适用于动物组织、细胞和多糖多酚含量不高的植物组织样本。

储存：室温可保存 2 年。 

使用防护建议：miRNA Reagent A 溶液中含有胍盐，其具有强烈的腐蚀性，试验时请务必佩戴防护眼镜、手套、口罩等防护措施，如有皮肤接触请立即用大量清水冲洗，再另行就医。

自备试剂：异丙醇、乙醇、75%异丙醇操作方法：1. 组织样本提取(1) 向 1.5ml EP 管中加入 300μl miRNA Reagent A。植物组织则再加入 10μl β-巯基乙醇，混合均匀。(2) 在液氮条件下充分将组织研磨粉碎，将一定的样品量（见样本使用量表）研磨成粉状的组织加入到上述 300μl miRNAReagent A 中，立即手腕用力震荡至组织粉末彻底溶解于裂解液中。室温静置 5min 以充分裂解细胞。

 注意：将组织加入到 miRNA Reagent A 后要迅速将组织震散，否则易引起组织成团状，不容易裂解。如发生成团状，务必用移液器将团状组织吹打松散。(3) 向上述裂解完毕的裂解液中加入 350μl miRNA ReagentB，上下颠倒混合均匀。13,000rpm 离心 5min，吸取 550μl上清液，转移到新的 1.5ml EP 管中。(4) 向上述溶液中加入 200μl 无水乙醇，手腕用力震荡数次，室温放置 5min。(5) 13,000rpm 离心 10min，转移 700μl 上清液到新的 1.5mlEP 管中。(6) 向上述溶液中加入 300μl 异丙醇，手腕用力上下颠倒数次。(7) 分两次将上述溶液倒入到 miRNA 吸附柱中，13,000rpm离心 1min，倒掉过滤液。(8) 向吸附柱中加入700μl 75%异丙醇洗涤一次，13,000rpm离心 1min，倒掉过滤液。(9) 向吸附柱中加入 500μl 无水乙醇洗涤一次，13,000rpm离心 1min，倒掉过滤液。(10) 吸附柱 13,000rpm 空离心 2min，去掉残留的乙醇。(11) 将吸附柱放入到新 1.5ml EP 管中，室温放置 2min，使残留乙醇挥发。在吸附柱滤芯上加入 30μl RnaseFree TEBuffer，室温静置 2min，13,000rpm 离心 2min，洗脱产物即为提取的 miRNA。（通常取 1～2μl 该产物，即可使用海基一步法 miRNA 反转录试剂盒进行反转录反应，。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！