FlaPure Animal Tissue Total RNA Extraction Kit 动物组织/细胞总RNA提取试剂盒（双柱型）

产品组成

保存条件

常温（10~25℃）保存 18 个月。

产品简介

本试剂盒可从≤30 mg 动物软组织(肝脏、脾脏、肾脏，脑等) 、≤1×10⁷个培养细胞中快速提取总 RNA。试剂盒基于硅胶柱纯化技术，提取过程中无需使用酚氯仿及 β-巯基乙醇，整个提取过程可在 25 min 内完成。试剂盒结合 DNA 过滤技术，可高效地过滤去除基因组 DNA，提取的总 RNA 纯度高，无蛋白和其它杂质的污染，可用于 RT-PCR、Northern Blot、Poly A 纯化、RNase 保护分析和体外翻译等实验。

产品特点

操作简便：25 min 内完成数个样品的总 RNA 提取；

高效去除基因组 DNA：独特的基因组 DNA 过滤柱，无需 DNase 处理；

安全低毒：无需酚、氯仿及β-巯基乙醇等有毒试剂；

RNA 纯度高：提取的 RNA 无杂质残留，适用于对纯度、完整性要求很高的下游实验。

注意事项

1. 第一次使用前应在漂洗液 RW1 中加入 4 倍体积的无水乙醇；

2. （可选）Reagent DM（消泡剂）: 每 1 mL Buffer RL 加入 5 µL Reagent DM（现用现配，可用枪头蘸取芝麻大小 Reagent DM 于离心管壁），Reagent DM 能高效消除匀浆过程产生的泡沫；

3. 使用无 RNase 的塑料制品和枪头避免交叉污染，经常更换新手套。因为皮肤经常带有细菌、汗液及 RNase 等，可能导致 RNA 降解；

4. RNA 在裂解液 RL 中时不会被 RNase 降解。但提取后继续处理过程中应使用不含 RNase 的塑料和玻璃器皿。玻璃器皿可在 150℃烘烤 4 h，塑料器皿可在 0.5 M NaOH 中浸泡 10 min，然后用水彻底清洗、灭菌；

5. 配制溶液如 50%、70%乙醇应使用 RNase-Free ddH₂O（将水加入干净的玻璃瓶中，加 DEPC至终浓度为 0.1%(V/V)，混匀放置过夜后高压灭菌）。

使用方法

一、从动物组织中提取总 RNA

本产品可处理≤30 mg动物组织，正确组织取样量是获得理想产量和纯度的关键。肝脏1~20 mg，脾脏/胸胰小于 10 mg。初次使用时，推荐动物组织量为 10~15 mg，根据结果再调整用量。处理肌纤维样品(肌肉/皮肤/心脏)，需另外订购 Proteinase K(20 mg/mL)。样品可用液氮研磨、机械/玻璃匀浆器等工具进行匀浆。

1. 取组织样品，加入 500~750 µL Buffer RL，用合适工具进行匀浆，室温静置 3~5 min；

注意：若样品为≤30 mg 的难裂解组织(肌肉/皮肤/心脏)，用 500~700 µL Buffer RL 匀浆肌肉类组织样本。取 500 µL 匀浆液，加入 250 µL RNase-Free ddH2O 和 20 µL Proteinase K(需另外订购), 颠倒混匀，55℃孵育 15 min。

2. 14,000 ×g 离心 5 min，按第 3 步进行操作；

二、从培养细胞中提取总 RNA

本产品单次可处理 10²~10⁷个细胞。初次使用时，建议使用 2~5×106个细胞。根据结果再调整细胞量。但不论何种情况，细胞量不要超过 1×10⁷。

1. 加入适量的 Buffer RL 至细胞样品中，打散细胞；

a. 悬浮细胞：离心收集的细胞，弹打或涡旋松散细胞沉淀，加入适量 Buffer RL，涡旋或用移液枪吸

打打散细胞。

b. 贴壁细胞：彻底吸弃培养液，向培养瓶或培养皿中加入适量的 Buffer RL。用移液枪吹打使细胞从

壁上脱落，转移至 1.5 mL RNase-Free 离心管中。

2. 用注射器或移液枪吹打裂解液 5~10 次打断 DNA，按第 3 步进行操作；

注意：样品量过多，裂解不充分会导致裂解液粘稠，堵塞 gDNA 过滤柱，如果裂解液非常粘稠可适当增加裂解液用量。

3. 把 RNase-Free FlaPure gDNA Remove Column 放在 2 mL 收集管中，把细胞裂解液或组织上清液转移至 gDNA 过滤柱中，14,000×g 离心 2 min；

注意：组织裂解液需高速离心去除杂质，细胞碎片会引起柱子的堵塞。处理某些样品时，离心后裂解液表面还可能会有一层脂类层，转移上清液尽量不要吸到这些物质。若 gDNA 过滤柱堵塞，可将滤液吸出加入适量裂解液匀浆后再转移至新的 gDNA 过滤柱中。

4. 丢弃 gDNA 过滤柱，加入等倍体积 70%乙醇至滤液中，用移液枪吸打 3~5 次；

注意：处理肝脏和脾脏时，用 50%乙醇代替 70%乙醇可以提高产量。若想更方便可以用 Buffer RW1 代替 70%乙醇。

5. 把 RNase-Free FlaPure RNA Column 放在 2 mL 收集管中，转移≤750 µL 混合液至吸附柱中。12,000×g 离心 30~60 s，倒掉收集管中的废液，把吸附柱放回收集管中；

6. (可选：若混合液超过 750 µL) 转移剩余的混合液至吸附柱，12,000×g 离心 30~60 s，倒掉收集管中的废液，把吸附柱放回收集管中；

7. 加入 500 µL Buffer RW 至吸附柱上，12,000×g 离心 30~60 s，倒掉收集管中的废液，把吸附柱放回收集管中；

注意：gDNA 过滤柱可去除 95~99%的 DNA 污染，若后续实验对 RNA 纯度比较严格，可选择使用DNase I（需另外订购）进行膜上 DNase 消化。

8. 加入 500 µL Buffer RW1 至吸附柱中，12,000×g 离心 30~60 s，倒掉废液，把吸附柱放回收集管中；

9. 重复步骤 8；

10. 12,000×g 离心 2 min，倒掉废液，将吸附柱置于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残留的漂洗液；

注意：此步骤目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除，漂洗液的残留，可能会影响后续的 RT 等实验。

11. 将吸附柱转移至新的 RNase-Free 离心管中，向吸附膜的中间部位悬空滴加 30~100 μL RNaseFree ddH₂O，室温静置 2 min，12,000×g 离心 1 min，得到 RNA 溶液，将洗脱的 RNA 溶液置于-80℃保存。

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