革兰氏阳性菌蛋白提取试剂盒 

货   号：ZY-6129  

规   格：50T/100T 

保   存：2-8℃保存

有效期：一年

 产品内容：

注：

 1. 蛋白酶抑制剂未开盖使用前也可以2-8℃储存。开盖使用后-20℃储存。 

 2. 蛋白酶抑制剂在2-8℃低温时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。 

 3. 试剂拆封后请尽快使用完！ 

产品简介： 

革兰氏阳性菌总蛋白提取试剂盒可以从各种革兰氏阳性菌菌体中提取总蛋白，试剂盒适用各种革兰氏阳性菌以及各种厚壁菌体的蛋白提取，也可用于纯化蛋白的粗品制备及总蛋白制备。提取过程简单方便。 

本试剂盒含有蛋白酶抑制剂混合物，阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提取高质量的蛋白提供了保证。 

本试剂盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、转录活性分析、Gel shift凝胶阻滞实验、酶活性测定等下游蛋白研究实验。 

本试剂盒提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白，可以用于不同的下游应用。根据不同的菌液样本以及不同的培养状况，每毫升菌液大概可以提得2-10mg蛋白。采用BCA或Lowry法进行蛋白定量。 

本试剂盒中不含有EDTA，与金属螯和层析等下游应用兼容。 

使用注意事项： 

  1.正式实验前请选取几个样本做预实验，以优化实验条件，取得最佳实验效果          

  2. 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖和管内壁上的液体离心至管底，避免开 盖时试剂损失。

  3. 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。

  4. 蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。

  5. 如果试剂盒不能短时间内用完，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。

  6. 可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。

  7. 下游实验如果是进行特定蛋白酶或磷酸酶的酶活性检测，提取液可以不加蛋白酶抑制剂或磷酸 酶抑制剂，注意提取过程保持低温操作，缩短离心时间。

  9. 样品或试剂被细菌或真菌污染或试剂交叉污染可能会导致错误的结果。 

  8. 禁止与其他品牌的试剂混用，否则会影响使用效果。

提取： 

1. 提取液制备：根据所需要提取的样本量，每 500μl 提取液 A 中加入 2μl 蛋白酶抑制剂和 5μl 蛋白稳定液，充分混匀后置冰上备用。       

  2. 在 4℃，10000×g 条件下将菌液离心 5 分钟，弃上清，尽量吸干剩余液体，收集菌体。

  3. 用 PBS 洗菌体 2 次。若为冷冻菌体直接进行下面操作步骤即可。

  4. 按每 100 mg 湿重菌体样本加入 500 μl 蛋白提取液，吹打混匀，冰上放置 20-30 分钟。

  5. 在 150-300w，10s 超声/10s 间隔条件下冰浴超声至菌液变澄清。

  6. 在 4℃，12000×g 条件下将提取液离心 5 分钟，弃沉淀，收集上清。

  7. 将上清移入另一干净离心管，即得革兰氏阳性菌蛋白样品。

  8. 将总蛋白样品定量后分装置于-80℃冰箱备用或直接用于下游实验。

注意事项： 

1. 本试剂盒仅供科学研究使用，不可用于诊断或治疗。 

2. 最好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿，可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗并彻底清除残留清洁剂。 

3. 实验后完成后所有样品及接触过的器皿应按照规定程序处理。 

4. 避免皮肤或粘膜与试剂接触。 

5. 如果试剂不小心接触皮肤或眼睛，应立即用水冲洗。