产品概述 product description

溶酶体是由一层单位膜包围，内含多种酸性水解酶的泡状结构。溶酶体含有40多种水解酶，其中包括蛋白酶、核酸降解酶和糖苷酶等。其主要功能是对细胞内物质的消化作用。此外溶酶体与器官形成、激素分泌的调节以及某些疾病的发生密切相关。溶酶体提取试剂盒可用于各种动物细胞和实体软、硬组织样本的溶酶体提取。提取的溶酶体具有生物活性，可以用于溶酶体功能研究、溶酶体染色、溶酶体蛋白提取等各种下游应用。 

保存温度

2-8℃

注意事项

1.长时间不使用可以-20℃储存。
2.试剂拆封后请尽快使用完！

适用样本

动物细胞/组织

检测方法

提取

试剂准备

1.PBS缓冲液 （pH7.4，实验室常用的10mM磷酸缓冲盐溶液（1X）） （phosphate buffer saline/Dulbecco’s PBS：约含8mM Na2HPO4、2mM KH2PO4、137mM NaCl和3mM KCl）

使用注意事项

1.旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
2.实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
3.最好使用Dounce匀浆器匀浆，如果没有Dounce匀浆器，也可用普通玻璃匀浆器匀浆，但是溶酶体回收率会下降。
4.若实验室离心机较小达不到30000×g离心力，或者离心管质量不能承受30000×g离心力，请使用能达到的最大离心力。

使用方法

细胞溶酶体提取：
1. 取1-2×107个细胞，在4℃，500×g条件下离心5分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞；
2. 用冷PBS洗涤两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
3. 加入400 μl冷的试剂 A，置冰上静置10分钟。
4. 用Dounce匀浆器匀浆30-40下。
5. 匀浆液在4℃，1000×g力条件下离心5分钟。弃沉淀，收集上清。
6. 将上清在4℃，3000×g力条件下离心10分钟。弃沉淀，收集上清。
7. 将上清在4℃，5000×g力条件下离心10分钟。弃沉淀，收集上清。
8. 将上清在4℃，20000-30000×g力条件下离心20分钟。弃上清，收集沉淀。
9. 在沉淀中加入400 μl冷的试剂B，混匀。
10. 在4℃，20000-30000×g力条件下离心20分钟。弃上清，收集沉淀。
11. 沉淀用溶酶体保存液C重悬。
12. 即得到溶酶体样品，置冰箱保存备用或直接用于下游实验。

组织溶酶体提取：
1. 取50-100 mg新鲜动物组织样本，用PBS清洗干净。
2. 用手术剪刀尽可能剪碎，用冷PBS洗涤两次。
3. 加入400 μl冷的试剂 A，置冰上静置10分钟。
4. 用Dounce匀浆器匀浆30-40下。
5. 匀浆液在4℃，1000×g力条件下离心5分钟。弃沉淀，收集上清。
6. 将上清在4℃，3000×g力条件下离心10分钟。弃沉淀，收集上清。
7. 将上清在4℃，5000×g力条件下离心10分钟。弃沉淀，收集上清。
8. 将上清在4℃，20000-30000×g力条件下离心20分钟。弃上清，收集沉淀。
9. 在沉淀中加入400 μl冷的试剂B，混匀。
10. 在4℃，20000-30000×g力条件下离心20分钟。弃上清，收集沉淀。
11. 沉淀用溶酶体保存液C重悬。
12. 即得到溶酶体样品，置冰箱保存备用或直接用于下游实验。

注意事项：该产品仅供科研实验使用，未经允许不得用于其它用途！以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。