二磷酸核酮糖羧化酶(Rubisco)活性
< 紫外分光光度法 50 管/48 样>
注 意:正式测定前务必取 3 - 5 个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
二磷酸核酮糖羧化酶(EC 4.1.1.39)是植物光合作用中的一个关键酶,既控制着CO2 的固定,同时又制约着碳素向Calvin循环和光呼吸循环分流,其活性的大小直接影响着光合 速率。
测定原理:
(1)在 Rubisco 的催化下,1 分子的核酮糖-1,5-二磷酸(RuBP)与 1 分子的 CO2 结合,产生 2 分子的 3-磷酸甘油酸(PGA);
(2)PGA 可通过外加的 3-磷酸甘油酸激酶和甘油醛-3-磷酸脱氢酶的作用,产生甘油 醛-3-磷酸,伴随着 NADH 氧化生成 NAD +;
(3)在 340 nm NADH 有特征吸收峰,而 NAD +没有此吸收峰,因此测定 340nm 吸 光度下降速率可以代表 Rubisco 的羧化酶活性。
需自备的仪器和用品:
紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL 石英比色皿、研钵、冰 和蒸馏水。
试剂的组成和配制:
提取液一:液体 50mL×1 瓶,4℃保存。
提取液二:液体 50mL×1 瓶,4℃保存。
试剂一:60mL×1 瓶,4℃保存;
试剂二:粉剂×1 瓶,-20℃保存;临用前加入 25mL 试剂一,充分混匀待用;用不完 的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融;
试剂三:粉剂×1 瓶,-20℃保存;临用前加入 25mL 试剂一,充分混匀待用;用不完 的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融;
试剂四:粉剂×1 瓶,-20℃保存;临用前加入 2.5 mL 试剂一,充分溶解待用;用不完 的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融;
(注意:试剂二、三、四溶解后,按需分装-20℃保存。)
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考!